叶酸的检测方法

近年来，叶酸对人类健康的影响越来越受重视，对叶酸检测要求也就越来越高。由于各种样品中成分复杂，叶酸的测定也比较复杂。叶酸含量的测定方法很多，例如：

1、高效液相色谱法( HPLC)

操作方法和所用药品分析相似：称取磨细的样品置于离心管中，加入流动相液体，超声波提取15 min－30 min。取出后加入流动相定容，摇匀后过滤，滤液用 HPLC 法分析。

高效液相色谱法的特点是测定结果准确、操作简便、省时省力、分析速度快、分离效果好，是近年来发展速度较快的测定叶酸的方法，分析操作方法和所用药品分析相似，适合检测纯品，但分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵。

2、高效液相柱后衍生法

选用含 12%乙腈 +88% 0. 05 mmo l /L 磷酸二氢钾溶液(pH =3.5)作为流动相，流速 1 m l /m in， 经 ODS C - 18反相色谱柱分离, 柱温设为 40℃，以0.5%过二硫酸钾溶液为衍生剂，流速为0.3   mL /min， 反应温度为 60℃，使用荧光检测器检测定量，激发波长为365 nm，发射波长为 450 nm，外标法测定叶酸含量。

本法利用叶酸经氧化剂氧化后具有荧光特性，采用柱后衍生法荧光检测器测定，大大提高了检测叶酸的灵敏度(较紫外检测提高了2个数量级)，避免了使用离子对试剂伤害柱子且能够准确定量，本方法简单、快捷、灵敏，满足日常分析要求。

3、同位素放射免疫法

同位素放射免疫法对多谷氨酸叶酸反应的相对灵敏度有较大的差别，随着叶酸浓度增加，反应的相对灵敏度增加，但多谷氨酸叶酸的反应曲线不可能与单谷氨酸叶酸的反应曲线重合；另一方面，多谷氨酸叶酸与结合蛋白的亲合性与单谷氨酸叶酸相比较高，不同的单谷氨酸叶酸衍生物反应灵敏度不同，放射免疫法也不适用于检测单谷氨酸叶酸衍生混合物。

该方法具有快速、简便的特点，同时由于叶酸放射免疫试剂盒的出现，很快得到普及，尤其广泛应用于临床实验室。但放射免疫法可用于检测和评价叶酸的营养状况，从定量检测的角度来讲，难以得到准确的叶酸质量分数值。

4、微生物测定法

此方法适用于食品中叶酸含量的测定，根据细菌对叶酸的营养需求，在一系列不含叶酸的培养基中从低到高添加已知含量的叶酸以及待测的食品样品，在37°C培养18h。因为有了叶酸，细菌能生长得很好，培养液发生浑浊。细菌越多，培养基就越浑浊，吸光度就越高。通过已知含量的叶酸样品的吸光度，以及待测样品的吸光度，就能确定待测样品中的叶酸含量。

微生物测定法的特点是灵敏度高，样品中被测物量含量极低时也能被测出。样品处理简单，不需要一系列的提纯步骤，前处理操作步骤简单。微生物法是目前应用最为广泛的，也是美国官方分析化学家协会的推荐方法，我国食品安全国家标准中关于婴幼儿食品和乳品中叶酸含量的测定，微生物法是**的测定方法。

国际上HiMedia公司生产的叶酸测定用培养基（货号：M543），该培养基的特点是不含痕量叶酸，有效避免标准曲线偏移和本底过高，测定结果准确可靠，由国际认证的GMP，CE和FDA，ISO9001，ISO13485等证书，成分符合《GB5009.211-2014 食品安全国家标准 食品中叶酸的测定》。

5、离子捕获法

该技术是目前叶酸检测技术中较新的研究成果，即在实验中，样品加入变性剂后叶酸与内源性结合蛋白分离，释放后的叶酸再与带有大量阴离子的亲合试剂结合，合成产物经过离子捕获池而与阳离子纤维结合，最后通过碱性磷酸酶与蝶酸（叶酸的类似物）结合物对叶酸结合蛋白上游离结合位点的探查，定量分析样品中叶酸的质量分数。当离子捕获法测定血清或红细胞中的叶酸时，其结果与同位素放射免疫法的结果具有良好的相关性。

该方法主要用于临床测定血清或红细胞中的叶酸含量。

6、聚合酶链 － 限制性片段长度多态性测定法

聚合酶链－限制性片段长度多态性测定原理是扩增产物用 2% 琼脂糖凝胶电泳检测，将PCR 产物纯化后酶切，经3 % 琼脂糖凝胶电泳分析，紫外凝胶成像系统下观察带型，根据带型判读基因型。通过基因型频率计算等位基因频率，以Hardy－Weinberg 平衡检验确认样本的群体代表性。

此方法检测速度快，无离子辐射，操作简单，可作为一般实验室常规检查和临床应用。

   北京缔一生物科技有限公司国内总代Ausbian血清系列,德国Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。细胞培养实验使用的Ausbian特级澳洲进口胎牛血清,干细胞完全培养基,马血清，德国MB支原体检测/祛除试剂盒,DNA污染祛除试剂,支原体PCR/qPCR定量试盒等产品。了解更多产品信息请继续浏览缔一生物官网：www.dyshengwu.com。