存在于实验室桌面、仪器、耗材以及空气中的DNA污染,对于实验会产生严重的干扰,尤其是气溶胶携带的DNA分子(一个气溶胶能携带上万个DNA),因在空气中漂浮,难以消除。那么我们可以采取什么方法,来解决这一问题呢?
1、气溶胶很容易在移液器加样的时候产生,因此是不可避免的。它会很快地发生沉降。因此,经常使用专门的DNA污染清除剂,如德国Minerva公司的PCR Clean喷雾剂和湿巾产品,对阻止DNA污染的扩散,无疑是一个不错的选择。
2、直接针对气溶胶的,就目前所知,只有空气过滤系统。气溶胶可以被过滤材料所吸附。因此,任何使形成气溶胶的危险性上升的操作都必须在生物安全柜或通风柜里进行,或者是开通实验室空调通风系统。如果不具备以上条件的,也应多注意房间通风。
3、PCR实验室内部区域进行区隔。PCR实验室原则上分为四个区域,即试剂准备区、样品处理区、扩增区、扩增产物分析区,前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品处理区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。
4、建议逐渐用荧光定量PCR取代常规PCR,因为荧光定量PCR能显著减少了实验室PCR产物污染的可能性。PCR产物是转基因检测实验室最主要的污染来源之一,而荧光定量PCR不需要电泳,因此反应结束后不需要开盖,避免了反应产物泄漏造成的污染。而进行凝胶电泳增加了检测步骤,易产生气溶胶污染。建议推进定量PCR的应用,并逐步替代定性PCR。
5、值得注意的是,要祛除DNA污染而不是仅仅灭菌的话,常规紫外线照射建议应延长至2小时,即使这样,紫外照射对祛除小片段(200bp以下)的DNA污染效果仍然不佳(参考文献:UV irradiation and autoclave treatment for elimination of contaminating DNA from laboratory consumables. 《Forensic Science International Genetics》, 2010,4(2) :89)。这时还应考虑其他的方法。
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