细胞活性检测方法

2024-05-16
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细胞活性的检测方法有多种,以下是一些常见的方法:

染色计数法:

化学染色法:如台盼蓝染色法,利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力,通过显微镜观察细胞的染色情况来判断细胞活性。台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色,而活细胞能阻止染料进入细胞内,故可以鉴别死细胞与活细胞。

荧光染色法:利用荧光染料对活细胞和死细胞的不同反应,通过荧光显微镜检测细胞活性。例如,碘化丙啶(PI)被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜,因此活细胞不被染料上色,只有死细胞或凋亡细胞才能被染上红色。

代谢活性检测:

MTT3-(4,5-二甲基噻唑-2-)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)试验:通过测量活细胞中线粒体脱氢酶的活性来评估细胞增殖和活性。

XTT试验:在健康细胞中,XTT通过线粒体酶转换成橙色的甲瓒染料,然后检测450nm处的相对吸光度来估计活细胞数量。

刃天青检测:将刃天青试剂添加到细胞培养物中,在健康细胞中,刃天青试剂通过脱氢酶还原成为荧光试卤灵,最终试卤灵的量与样品中的活细胞成比例。

细胞增殖能力检测:

CCK-8Cell Counting Kit-8)试验:类似于MTT,但使用水溶性四唑盐WST-8,减少了实验步骤。

BrdU5-溴脱氧尿苷)掺入试验:通过检测BrdUDNA合成期的掺入来评估细胞增殖和活性。

细胞凋亡检测:

Annexin V/PI染色:通过流式细胞仪检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜完整性来识别早期和晚期凋亡细胞。

还原性染料检测法:使用发光/荧光指示剂(如WST-8和刃天青)监测细胞的代谢活性。

荧光酯酶底物检测法:通过测量细胞酶活性和膜完整性来确定细胞活性。细胞内酯酶将底物水解成荧光化合物,荧光化合物的信号强度与活细胞数量成正比。

线粒体膜电位检测法:利用线粒体膜电位的变化来评估细胞活性。

以上方法各有特点和适用场景,可以根据实验的具体需求和条件选择合适的方法。