细胞支原体污染是一个常见的问题,特别是在细胞培养过程中。支原体污染可能会对细胞的生长、代谢以及实验结果产生显著影响。以下是一些处理细胞支原体污染的方法:
一、立即停止使用污染的细胞
一旦确认细胞被支原体污染,应立即停止使用该批次的细胞,并避免其进一步扩散。
二、对污染源进行全面消毒和清洁
对培养环境、试剂和操作过程进行全面消毒和清洁,以消除潜在的污染源。
三、选用适当的处理方法
根据细胞的珍贵程度和实验需求,可以选择不同的处理方法:
丢弃污染细胞
对于非重要的细胞,如培养中的细胞、WCB的细胞等,将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。
使用支原体杀除剂
对于珍贵的、样品不可再得的细胞,或价格昂贵的种子细胞,可以选用特异性的支原体杀除剂进行清除。例如,使用Mynox®(由Minerva公司生产)等生物制剂,这些试剂可在短时间内(如2-3小时)特异性地杀除支原体,且对细胞无毒性。但需注意,使用这些试剂后可能需要更换新的培养耗材和培养液,并重新培养细胞。
药物辅助加温处理
先用药物处理污染的组织培养物,然后将培养物放在41℃培养18小时,以杀死支原体。但这种方法可能对细胞有不良影响,需要谨慎使用。
使用支原体特异性血清
用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染。特异抗体可抑制支原体生长,经抗血清处理后一段时间(如11天)即可转为阴性。
巨噬细胞吞噬法
从动物腹腔采取巨噬细胞,纯化后加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。巨噬细胞能够吞噬并清除支原体。
反复离心洗涤
通过细胞营养驯化、优质细胞群的筛选、细胞清洗和反复离心洗涤等方法,利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。这种方法可能需要结合敏感抗生素的抑杀作用以提高效果。
更换培养基和耗材
更换新的、经过验证的无支原体污染的试剂和培养基,并重新开始细胞培养。
四、预防未来污染
在实验室工作中,应严格遵守无菌操作规范,确保实验环境的清洁和卫生。
定期对实验设备进行维护和消毒,避免交叉污染。
对于细胞培养等关键实验环节,建议进行定期的质量控制和监测,以确保实验结果的准确性和可靠性。
五、注意事项
在处理支原体污染时,应仔细阅读并遵循相关试剂和设备的操作说明。
对于不确定的处理方法,应咨询实验室管理人员或相关领域的专家。
支原体污染可能对实验结果产生显著影响,因此在实验前应进行支原体检测以确认细胞的无污染状态。