在拿到细胞到开始培养的过程中,预防支原体污染应注意以下几点:
1.新购产品检测
新到的细胞、培养基、血清都可以做一下简单的污染检测后再开始实验。另外要注意每次试剂量配制不宜过多,建议分装使用,分装时用针头滤器过滤一次。
2.控制环境污染
要保证实验室和培养箱的洁净,按时杀菌,可以用酒精擦拭和紫外照射的方法。必要时可以通臭氧过夜。
3.严格无菌操作
进行实验操作时一定要按照实验室的要求,确保无菌操作。感冒咳嗽时尽量不要使用细胞房,如果必须使用,请在实验后彻底清洁消毒使用空间。准备好细胞房专业洁净衣,戴好口罩和手套。
所有进超净台的物品**都用酒精擦拭一遍,超净台里面的东西一定要尽量少放,东西太多会影响超净台内空气流通及空气除菌细胞培养基和器材要保证无菌;
4.最小化抗生素使用频率
非珍贵细胞污染直接丢弃,避免抗生素滥用导致抗药性产生。
支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。
支原体最突出的结构特征是没有细胞壁,一般来讲,对作用于细胞壁生物合成的抗生素,如内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性、常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮。
支原体污染在细胞培养中实际上是比较常见的, 据资料, 可达30%甚至更高。支原体污染时细胞表现为长得不好,也不死亡, 同时, 培养基又是清亮的。时间长达一周也没有什么变化。这时基本上可以判断出是支原体污染了, 愿意检测就检测一下,不愿意直接用清除试剂处理。
避免细胞污染,可以从预防着手,超净工作台物品放置要合理、进入细胞房要换鞋,穿实验服,实验员戴手套后要用酒精消毒、避免细胞交叉污染等。