支原体污染是实验室细胞培养中常见的问题,它能引起细胞生理和代谢变化,影响实验结果的准确性和重复性。因此,及时识别和处理支原体污染至关重要。
判断标准
1.pH值变化:支原体污染可能会导致培养基pH值异常。
2.细胞形态变化:污染后的细胞可能形态异常,生长速度减慢。
3.细胞黏附性变化:某些类型的细胞可能会失去黏附性。
4.细胞死亡率增加:细胞的存活率下降,死亡率提高。
检测方法
1.直接培养:将样本接种到支原体专用培养基中,观察是否有生长。
2.荧光染色:使用荧光标记的DNA探针特异性结合支原体的DNA或RNA,通过荧光显微镜检查。
3.PCR检测:使用特异性引物检测支原体的DNA,这是一种快速、敏感的检测方法。
4.ELISA检测:通过检测细胞培养上清液中支原体特异性抗原来识别污染。
处理方法
1.废弃严重污染的细胞:如果细胞严重污染,最安全的方法是废弃这些细胞,彻底清洗并消毒使用过的器皿和设备。
2.使用抗生素或者专业的细胞支原体祛除试剂治疗:
推荐使用MB公司生产的复合抗生素Zell Shield®。Zell Shield®通过阻止支原体、真菌、霉菌、致命病菌增殖过程中DNA及蛋白的合成,有效抑制上述微生物的增殖。
3.彻底清洁和消毒:对实验室表面、设备以及操作环境进行彻底的清洁和消毒。
4.防止交叉污染:确保使用无菌操作技术,包括使用无菌工具和消毒设备,以防止污染扩散。
5.定期检测:即使没有明显的污染迹象,也应定期对细胞培养进行支原体检测,以确保培养环境的清洁。