细胞培养污染源及其挽救措施

　　在细胞培养过程中发生污染时，我们应该如何减少损失，避免后续培养重蹈覆辙。

　　污染来源

　　污染物进入培养系统有许多不同的途径。**种是通过组织培养材料。我们在使用前应对所有培养使用到的塑料耗材和玻璃器皿进行消毒，尽管许多耗材已经在售出前进行了消毒，但我们在打开包装时还应小心污染。

　　此外，组织培养液，如培养基、血清和PBS等培养过程中使用的液体，也应过滤除菌(过0.22μm孔径的膜)。我们在启封培养用的试剂时，应该检测其是否被污染(无菌培养)。进入组织培养柜的所有设备应喷洒70%乙醇或替代消毒剂(例如：稀释的次氯酸盐或1%苯扎氯铵)。

　　从水浴锅中取出的瓶子，这些应该用乙醇喷洒表面杀菌，因为水浴后可以有效地将真菌吸引到它们的外表面。脏的实验服是另一个极好的污染源。在洁净工作台的无菌环境中工作，应注意避免持续或不必要地进出洁净工作台。应尽可能减少气溶胶产生(一般使用吸引器的时候容易产生)。培养物或培养基发生溢出时，应立即清洗。此外应定期彻底清洗培养箱和洁净工作台。培养操作时尽量减少细胞培养室的人员走动，减少培养箱的开闭，以此来降低微生物传播的可能性!

　　最后，传播污染的一种常见方式是将细胞系从另一个位置转移到实验室。实验室新引入的细胞系应谨慎隔离和处理，直到证明不含微生物，除非在转移前已确认不含微生物(例如，如果从正规的细胞库中获得)。

　微生物污染的预防和抗生素的使用

　　防止微生物污染的基石是无菌技术的践行。常规细胞培养中抗生素从不缺席，但出于多种原因，通常不鼓励使用。首先，优秀无菌技术的实施使抗生素的添加变得不必要。尽管抗生素可能会抑制微生物污染，但它们可能无法彻底消除污染，并且可能会导致产生耐药性微生物。

　　无菌技术不佳不应依赖抗生素使用来改善，重要的是尽早发现污染源。有一项数据分析支持了这一观点：①72%在抗生素中连续生长的培养物显示支原体呈阳性，而在没有抗生素的情况下仅7%培养物被感染。②抗生素可能会影响培养细胞的生化数据，从而影响实验结果。

　　短期使用抗生素在许多不同情况下可能具有有用的战略价值。其中包括原始样品的初始培养(如原代细胞的分离)以及处理受污染的样品(已经是实验室独苗的那种，或者是非常非常珍贵的)。后者将取决于污染程度，并且仅在污染程度仍处于相对早期阶段时才可行。在大多数情况下，受污染的培养物应立即进行高压灭菌，废弃!

污染培养物的挽救措施

　　对于那些是实验室独苗且异常珍贵的培养物，他们如果被污染了，在早期消除污染可能是可行的。首先我们要确定污染类型(细菌、真菌、酵母或支原体)，然后我们可以使用Zell Shield®，细胞支原体去除剂，该产品是通过阻止支原体、真菌、霉菌、致命病菌增殖过程中DNA及蛋白的合成，有效抑制上述微生物的增殖。无细胞毒性，采用复合支原体敏感抗生素，对大多数细胞株无毒。在细胞培养期间，Zell Shield®始终保持稳定的活性。Zell Shield®为无菌溶液，可直接加入培养基使用。