qPCR实验过程中如何避免核酸污染

在定量聚合酶链式反应（qPCR）实验中，核酸污染是一个常见的问题，它不仅影响实验结果的准确性，还可能带来严重的假阳性或假阴性结果。因此，避免核酸污染是确保实验成功的关键。以下是一系列预防和处理核酸污染的措施。

1. 实验室的合理布局与分区

合理的实验室布局是预防核酸污染的基础。一个标准的qPCR实验室应分为试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区和产物分析区。每个区域应独立通风，通过压力系统控制空气流动方向，形成单**向，即从试剂准备区流向产物分析区。这种布局可以大大减少不同区域间的交叉污染。

2. 实验设备的专用与清洁

各区域都应有专用的仪器设备，并明确标记，避免设备物品如加样器或试剂等在不同区域间混淆使用。此外，实验设备应定期清洁和消毒，特别是移液器、离心机等频繁使用的设备。移液器污染是一个值得注意的问题，操作时应小心，避免将样品或模板核酸吸入枪内或粘上枪头。使用德国MB公司的PCR Clean清洁实验环境

3. 实验操作的规范与防护

实验人员需要严格遵守操作规程，加强个人防护。在标本处理、试剂配制、核酸扩增等关键环节，应采用生物安全柜等专用设备，以有效捕获和过滤实验过程中产生的气溶胶。实验结束后，应及时对实验台面、仪器设备等进行彻底清洁和消毒，防止残留污染。

4. 试剂与耗材的管理

所有PCR试剂都应小量分装，以减少重复加样次数和污染机会。PCR试剂、PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一冰箱。使用一次性耗材，如吸头、离心管等，可以避免交叉污染。

5. 设立适当的对照

设立阳性对照和阴性对照是验证实验可靠性和判断扩增系统可信性的重要手段。阳性对照以能出现扩增条带的最低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性。阴性对照则用于检测实验过程中是否存在污染。

6. 实验室的清洁与消毒

定期对实验室进行全面消毒，包括使用紫外线照射、化学消毒剂喷洒等方法。使用专业的核酸污染清除剂对实验室台面、设备、地面等进行彻底清洁和消毒。清理污染物时，应严格遵循活病毒生物安全操作要求，采用压力蒸汽灭菌处理，并进行实验室换气等，防止次生危害。

7. 实验后的处理与监测

实验结束后，所有的试剂应按照要求进行存放，废料和废液及时清理，避免存放过多和过久。使用有效氯含量的消毒水对移液枪、离心管架等物品进行浸泡消毒。对污染区域内的设备，如扩增仪、全自动提取仪等，使用核酸气溶胶污染清除剂进行反复处理。同时，设计阴性对照组，根据阴性对照确认污染情况，确保污染得到控制后再恢复正常实验。

避免核酸污染需要从实验室布局、设备管理、实验操作、试剂与耗材管理、对照设立、清洁与消毒以及实验后处理等多个方面入手。只有严格遵守这些措施，才能确保qPCR实验的准确性和可靠性。