PCR实验中DNA/RNA污染怎么办

在PCR实验中，DNA/RNA污染是一个常见且严重的问题，它可能导致实验结果的假阳性或误差。以下是一些针对PCR实验中DNA/RNA污染的处理措施：

一、污染源分析

首先，需要明确污染源。PCR实验中的DNA/RNA污染可能来自多个方面，包括但不限于：

PCR扩增产物的污染：PCR产物经反复多次的扩增，其复制量远远超过PCR的检测极限，所以即使是极微量的污染也足以造成实验结果假阳性。

试剂的污染：在试剂的配制过程中，可能因接触污染的容器、移液器、枪头、溶液等而导致试剂被污染。

待测样品的污染：放置样品的容器被污染，或由于容器密封不严导致样品与外界接触被污染；在核酸提取过程中使用了被污染的移液器或枪头；某些样品中含有病毒，若弥散到空气中则有可能形成交叉污染。

气溶胶污染：气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的，开盖、晃动反应管及污染加样器的反复吸样都可能形成气溶胶，从而导致交叉污染。

二、预防措施

为预防DNA/RNA污染，应采取以下措施：

设置阴性对照：设置一个不含模板DNA但含有PCR系统中所有其他成分的对照反应，以监测污染情况，判断污染原因，并采取措施防止和消除污染。

实验室分区：按照相关规定对PCR实验室进行分区，确保工作和空气流向严格遵循试剂准备区→标本制备区→PCR扩增区→产物分析区的顺序。

提高规范操作意识：定期组织全员进行防污染安全培训，宣讲PCR实验室操作规范，并印发相关文件供学习。

常规操作清洁：在样本处理前后，使用专门的PCR污染清除剂，比如：PCR-Clean™，清洁设备、耗材、操作台等。

三、处理措施

一旦PCR实验中出现DNA/RNA污染，应采取以下处理措施：

重点清洁：对重点区域、核酸提取仪、PCR仪、离心机等关键设备进行清洁操作，确保气溶胶污染没有累积。

月度清洁：有计划地进行月度大清理，使用PCR污染清除剂对实验室内的大面积区域进行清除DNA/RNA气溶胶污染物的操作。

紫外照射：每天工作完毕后，开启紫外灯照射工作区一定时间（如30分钟），以杀灭可能存在的微生物和降解DNA/RNA污染。在提取核酸后，应将紫外线照射时间适当延长。

更换试剂和耗材：如怀疑试剂或耗材被污染，应立即更换新的试剂和耗材，如引物、酶、去离子水和EP管等。

更换PCR扩增区域：如污染严重，可考虑更换PCR扩增区域，以避免交叉污染。

四、监控与应急处理

污染监控：安排质控员记录阳性率及假阳性的发生频率，及时发现异常。同时采集环境中的样本进行核酸污染分析，以便尽早发现污染源并尽快清除污染。

应急处理：如PCR实验室出现阳性率异常升高、空白对照/阴参频繁出现假阳性或发现未知扩增条带重复出现等情况，应立即使用PCR污染清除剂进行紧急污染源的排除和清理。

综上所述，PCR实验中的DNA/RNA污染需要采取综合措施进行预防和处理。通过明确污染源、采取预防措施、及时处理污染以及加强监控与应急处理等措施，可以确保PCR实验的准确性和可靠性。