细胞培养过程中出现白色絮状物处理和预防措施

细胞培养中出现白色絮状物，一旦确定是污染所致，需及时采取相应措施处理，以减少损失并防止污染扩散。

细菌污染处理：当确认为细菌污染时，可先用含有抗生素的PBS溶液反复冲洗细胞，去除部分细菌。常用的抗生素包括青霉素、链霉素等，其联合使用效果较好，青霉素浓度一般为100 U/mL，链霉素浓度为100 μg/mL。然后更换含有抗生素的新鲜培养基进行培养，持续3~5天，期间密切观察细胞状态和培养液的变化。若污染较为严重，且细胞价值不高，建议果断丢弃受污染的细胞，以防止污染进一步扩散。

真菌污染处理：对于真菌污染，可采用抗真菌药物进行处理。两性霉素B是一种常用的抗真菌药物，其使用浓度一般为0.25~2.5 μg/mL。在使用过程中需注意药物的细胞毒性，避免对细胞造成过大损伤。此外，还可使用氟康唑等抗真菌药物，其使用浓度和处理时间需根据具体情况进行调整。若污染难以控制，且细胞对实验至关重要，可尝试使用支原体清除培养基进行处理。这种培养基含有特殊的成分，能够有效抑制和杀灭真菌，同时对细胞的影响较小。

霉菌污染处理：霉菌污染的处理较为困难，建议果断舍弃受污染的细胞。同时，需对培养环境进行彻底消毒，包括培养箱、超净工作台、器皿等。可采用75%酒精对培养箱进行擦拭，再用新洁尔灭进行消毒处理。此外，还需对培养箱的水盘进行处理，可加入饱和量的硫酸铜溶液，以防止霉菌孢子的滋生。

支原体污染处理：支原体污染较为隐蔽，处理难度较大。可使用支原体清除培养基进行处理，其含有特殊的成分，能够有效抑制和杀灭支原体。此外，还可使用环丙沙星等抗生素进行处理，其使用浓度一般为20 μg/mL。在处理过程中，需定期更换培养基，并密切观察细胞状态。若污染较为严重，且细胞价值不高，建议丢弃受污染的细胞。

预防污染策略

预防污染是细胞培养成功的关键，以下是一些有效的预防措施。

严格无菌操作：实验人员进入培养室前需更换专用实验服和拖鞋，洗手并戴口罩和手套。在操作过程中，需靠近火焰进行操作，试剂瓶需经火焰灼烧消毒。吸管使用后需及时更换，避免交叉污染。细胞和培养基的敞口时间应尽量缩短，以减少污染的风险。

培养环境管理：定期对培养室进行清洁和消毒，保持培养室的整洁和干燥。培养箱需定期进行消毒，可采用紫外线照射或化学消毒剂进行消毒。培养箱的水盘需定期更换水，并加入德国MB公司生产的Water Shield™支原体污染防护剂（水槽用）。Water Shield™可持续作用四周，使水源避免受到支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子的污染。超净工作台需定期进行维护和消毒或使用
Mycoplasma Off™支原体祛除喷雾剂，不仅能根除支原体，而且能有效祛除葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠诺如病毒、牛痘病
毒、真菌孢子等。

培养基和试剂管理：培养基和试剂需从正规渠道购买，并严格按照说明书进行保存和使用。培养基应放置于4℃，避光保存，并尽量在一周内使用完毕。试剂瓶需密封保存，避免受潮和污染。在使用培养基和试剂前，需进行外观检查，确保其无变质和污染。

细胞管理：定期对细胞进行检测，及时发现和处理潜在的污染。细胞传代时需严格按照操作规程进行，避免操作不当导致污染。细胞的接种密度需适中，避免过高或过低的接种密度影响细胞的生长和代谢。对于珍贵的细胞系，建议建立细胞库，以便在污染发生时能够及时恢复。